RU 2343197 С2, 10.01.2009. Von Groll A, Martin A, Jureen P, Hoffner S, Vandamme P, Portaels F, Palomino JC da Silva PA. Fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis and mutations in gyrA and gyrB // Antimicrob Agents Chemother. - 2009 Oct; 53(10):4498-500. Abass NA. Suleiman KM. El Jalii IM. Differentiation of clinical Mycobacteriumtuberculosis complex isolates by their GyrB polymorphism // Indian J Med Microbiol. - 2010 Jan-Mar; 28(1):26-9. Augustine F.B. Cheng, Wing W. Yew, Edward W.C. Chan, Miu L. Chin, Mamie M.M. Hui and Raphael C.Y. Chan. Multiplex PCR Amplimer Conformation Analysis for Rapid Detection of gyrA Mutations in Fluoroquinolone-Resistant Mycobacterium tuberculosis Clinical Isolates // Antimicrob Agents Chemother. - 2004 February; 48(2): 596-601.
Имя заявителя:
Государственное учреждение здравоохранения Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Департамента здравоохранения г. Москвы (RU)
Изобретатели:
Носова Елена Юрьевна (RU) Краснова Мария Александровна (RU) Букатина Анастасия Александровна (RU) Галкина Ксения Юрьевна (RU) Гикало Марина Борисовна (RU) Мороз Аркадий Максович (RU) Литвинов Виталий Ильич (RU)
Патентообладатели:
Государственное учреждение здравоохранения Московский городской научно-практический центр борьбы с туберкулезом Департамента здравоохранения г. Москвы (RU)
Реферат
Изобретение относится к биотехнологии. Способ по изобретению включает клонирование исследуемой последовательности в гене gyrB ДНК М.tuberculosis (МБТ) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), с дальнейшей денатурацией ПЦР-продукта в присутствии денатурирующего раствора для получения одноцепочечных фрагментов ДНК. Далее выявляют в них мутации путем разделения данных фрагментов в полиакриламидном геле. Для проведения ПЦР была подобрана пара праймеров: «внешние» F1 - 5'AGAGTTGGTGCGGCGTAAGA3', R1 - 5'AACACATGCCCGTTCTCGAT3' и «внутренние» F2 - 5'TAAGAGCGCCACCGACATCG3', R2 - 5'GCATGAACCGGAACAACAAC3', и режимы амплификации (1-й этап - 94° - 4 мин; 2-й этап - 94° - 30 сек, 59° - 40 сек, 72° - 40 сек (25 циклов); 3-й этап: 72° - 4 мин; 10° - хранение), позволяющие клонировать ДНК М.tuberculosis не только из выросших культур, но и непосредственно из биологических секретов (мокрота, БАЛ). Денатурацию полученных ампликонов проводят в денатурирующем растворе, дестабилизирующем двойную спираль при нагревании. Электрофоретическое разделение полученных одноцепочечных фрагментов ДНК проводят в 8% полиакриламидном геле с 5% глицерином при напряжении 400 вольт в течение 5 ч при 8°С. Наличие мутаций в исследуемом гене определяют путем сравнения степени расхождения денатурированных нитей ДНК исследуемого и чувствительного штаммов М.tuberculosis к фторхинолонам. Способ позволяет определять чувствительность МБТ к фторхинолонам в более короткие сроки (2 дня), он доступен и безопасен. 1 ил.
Поиск патентов
Получить полное описание патента