WO 2004024909 A2, 25.03.2004. WO 2004099254 A2, 18.11.2004. WO 0114570 A1, 01.03.2001. RU 21308968 C1, 27.05.1999.
Имя заявителя:
Мерц Фарма ГмбХ унд Ко.КГаА (DE)
Изобретатели:
ШПЕХТ Фолькер (DE)
Патентообладатели:
Мерц Фарма ГмбХ унд Ко.КГаА (DE)
Приоритетные данные:
21.01.2005 DE 102005002978.7
Реферат
Полипептиды или белки в двухцепочечной форме получают путем рекомбинантной экспрессии в клетках-хозяевах Е. coli. Полипептид или белок проявляет свою биологическую активность в виде двухцепочечного полипептида или белка; С-концевая аминокислотная группа первой цепи представляет собой группу Arg или Lys; вторая цепь белка/полипептида имеет на своем N-конце от 1 до 20 аминокислотных групп и пентапептидную последовательность VPXGS (PRS), где Х представляет собой любую встречающуюся в природе аминокислоту, где V - Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro или Gly, P - Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val или Gly, G - Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe или Val, и S представляет собой Ser, Tyr, Trp или Thr. Способ получения продукта по изобретению включает следующие стадии: модификацию полипептида или белка на уровне нуклеиновой кислоты, так что этот полипептид или белок в его модифицированной форме содержит последовательность VPXGS в его области петли, где X, V, P, G и S - такие, как определено выше; введение конструкции, модифицированной на уровне нуклеиновой кислоты, в клетки Е. coli; культивирование, а затем лизис клеток-хозяев и выделение двухцепочечного полипептида или белка, представляющего собой, например, ботулинический нейротоксин, в частности ботулинический нейротоксин (BoNT(A)) типа А. Полученные белки/полипептиды обеспечивают цитотоксическое действие при малых дозах применения. 3 н. и 20 з.п. ф-лы, 9 ил.