HARRIS L.M. ET AL., Northern, morphological, and fermentation analysis of spo0A inactivation and overexpression in Clostridium acetobutylicum ATCC 824, J Bacteriol, 2002, v.184, no.13, pp.3586-3597. FABRET C. ET AL., A new mutation delivery system for genome-scale approaches in Bacillus subtilis, Mol Microbiol., 2002, v.46, no.1, pp.25-36. WO 03064623 A2, 07.08.2003.
Имя заявителя:
МЕТАБОЛИК ЭКСПЛОРЕР (FR)
Изобретатели:
СУКЕЛЬ Филипп (FR) ФИГГ Райнер (FR) КРУ Кристиан (FR)
Патентообладатели:
МЕТАБОЛИК ЭКСПЛОРЕР (FR)
Реферат
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу замены последовательности ДНК-мишени посредством гомологичной рекомбинации в Clostridium acetobutylicum, способу замены двух или более генов-мишеней посредством гомологичной рекомбинации в одной и той же клетке С.acetobutylicum, трансформированной клетке Clostridium acetobutylicum, трансформирующему вектору. Способ включает трансформацию клетки Clostridium acetobutylicum вектором, содержащим: ориджин репликации, позволяющий осуществлять его репликацию в С.acetobutylicum; замещающую кассету, содержащую первый маркерный ген, окруженный двумя последовательностями, гомологичными выбранным участкам около последовательности ДНК-мишени, позволяющими осуществлять рекомбинацию данной кассеты; второй маркерный ген, представляющий собой upp встречно-селектируемый маркер. Осуществляют селекцию клеток с интегрированной в их геном указанной кассетой, которые экспрессируют первый маркерный ген. Проводят селекцию клеток с элиминированным указанным вектором, которые не экспрессируют второй маркерный ген. Предложенное изобретение позволяет получать трансформированную клетку Clostridium acetobutylicum, которая является генетически стабильной и безмаркерной. 4 н. и 27 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 4 пр.
Поиск патентов
Получить полное описание патента