WO 2008132485 A2, 06.11.2008. DATABASE: GenBank: ABD92772.1, 12.02.2008 и YU PLISOVA E et al. "A highly active alkaline phosphatase from the marine bacterium cobetia", Mar Biotechnol (NY). 2005 May-Jun; 7(3): 173-8. Epub, 2005 May 26. CHIH-JUNG KUO et al. "Engineering a novel endopeptidase based on SARS 3CLpro", BioTechniques 47: 1029-1032, December 2009. RU 2077577 C1, 30.09.1994. JP 06-153938, 03.06.1994.
Имя заявителя:
Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН (ТИБОХ ДВО РАН) (RU)
Изобретатели:
Балабанова Лариса Анатольевна (RU) Рассказов Валерий Александрович (RU)
Патентообладатели:
Учреждение Российской академии наук Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН (ТИБОХ ДВО РАН) (RU)
Реферат
Изобретение относится к области биохимии. Представлена плазмида, определяющая синтез щелочной фосфатазы СmАР, включающая NcoI/SacI-фрагмент плазмиды pET-40b(+) (Novagen) и фрагмент ДНК, размером 1530 пар оснований, содержащий химерный ген, состоящий из структурной части гена СmАР, адаптированной по N-концу для экспрессии в клетках E.coli, и нуклеотид, кодирующий специфическую последовательность для протеазы TEV. Описан штамм E.coli Rosetta(DE3), трансформированный указанной плазмидой, - продуцент химерного белка, включающего аминокислотную последовательность рекомбинантной щелочной фосфатазы СmАР. Предложен способ получения рекомбинантной щелочной фосфатазы СmАР, включающий стадии: инкубирования указанного штамма-продуцента в жидкой питательной среде LB в течение 12 ч при 20°С, осаждения бактериальных клеток центрифугированием, дезинтеграции суспензии клеток в буфере, центрифугирования экстракта, хроматографии надосадочной жидкости на колонке с металлоафинной смолой, элюции белка, концентрирования активных фракций ультрафильтрацией, инкубирования с протеазой TEV, концентрирования раствора белка и выделения целевого продукта гель-фильтрацией. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 3 пр.
Поиск патентов
Получить полное описание патента