РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pET - 32a, КОДИРУЮЩАЯ ГЕН ЛИГАНД - СВЯЗЫВАЮЩЕГО ДОМЕНА РЕЦЕПТОРА II ТИПА ТРАНСФОРМИРУЮЩЕГО ФАКТОРА РОСТА - ЧЕЛОВЕКА (TRII), ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ СЛИТНОГО БЕЛКА ТИОРЕДОКСИН/TRII И СПОСОБ РЕНАТУРАЦИИ И ОЧИСТКИ ЦЕЛЕВОГО БЕЛКА TRII
Christian С. BOESEN et al. Development of a recombinant bacterial expression system for the active form of a human transforming growth factor b type II receptor ligand binding domain. Protein expression and purification. 2000, vol.20, pp.98-104. RU 2333917 C2, 27.07.2006.
Имя заявителя:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Изобретатели:
Гаспарян Марине Эдуардовна (RU) Елистратов Павел Алексеевич (RU) Долгих Дмитрий Александрович (RU) Кирпичников Михаил Петрович (RU)
Патентообладатели:
Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН (RU)
Реферат
Изобретение относится к биотехнологии. Описана рекомбинантная плазмидная ДНК pET-32a/TRII. Плазмида состоит из BglII/HindIII-фрагмента ДНК плазмиды рЕТ-32а, содержащего lacI-промотор E.coli, T7 промотор, Trx·Tag кодирующую последовательность, His·Tag кодирующую последовательность, S·Tag кодирующую последовательность, T7 терминатор, lacI-кодирующую последовательность, bla-кодирующую последовательность, последовательность f1 участок ori инициации репликации, а также BglII/HindIII фрагмента гена, кодирующего ДНК синтетического гена TRII. Представлен штамм бактерий Escherichia coli BL21 (DE3)/pET-32a/TRII - продуцент слитного белка тиоредоксин/TRII. Предложен способ выделения целевого белка TRII человека. Растворимую фракцию цитоплазматических белков выделяют из штамма-продуцента Escherichia coli BL21(DE3)/pET-32a/TRII. Проводят хроматографическую очистку с последующей ренатурацией слитного белка тиоредоксин/ TRII. Далее белок инкубируют в течение 72 часов при 4°С в буфере, содержащем 0.5 М аргинина, в присутствии окисленного и восстановленного глутатиона в соотношении 1:50 мМ соответственно. Затем проводят диализ, расщепление каталитической субъединицы рекомбинантной энтеропептидазой и очистку целевого белка TRII от тиоредоксина. Изобретение позволяет получать повышенный выход высокоочищенного TRII белка человека с нативным N-концом (140 мг с одного литра культуры клеток). 3 н.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
Поиск патентов
Получить полное описание патента